Отсутствие антител к белкам ВИЧ у пациентов со СПИДом в опытах Монтанье и Галло


В работе Монтанье на картинке B, линия 1, совершенно четко видно, что антитела из сыворотки пациента BRU не реагируют с  белками сконцентрировавшихся в градиенте 1,16 "ретровируcных" частиц, которые были выделены из пациента BRU. Реагируют антитела только с белками из клеточного лизата (картинка A, линия 1).

Из статьи: Isolation of a T-Lymphotropic Retrovirus from a Patient at Risk for Acquired Immune Deficiency Syndrome (AIDS)
Из статьи: Isolation of a T-Lymphotropic Retrovirus from a Patient at Risk for Acquired Immune Deficiency Syndrome (AIDS)

В работах Галло точно также антитела из сыворотки пациентов со СПИДом реагировали не с белками ретровирусных частиц, сконцентрировавшихся в градиенте 1,16, а с белками из клеточного лизата (за одним исключением, о нем отдельно).

Тут следует обратить внимание на слово intracellular, то есть клетки лизировали, а не очищали вирус из супернатанта.

Из статьи: Frequent Detection and Isolation of Cytopathic Retroviruses(HTLV-III) from Patients with AIDS and at Risk for AIDS
Из статьи: Frequent Detection and Isolation of Cytopathic Retroviruses(HTLV-III) from Patients with AIDS and at Risk for AIDS

Далее больше деталей:

Из статьи:  Serological Analysis of a Subgroup of Human T-Lymphotropic Retroviruses (HTLV-III) Associated with AIDS
Из статьи: Serological Analysis of a Subgroup of Human T-Lymphotropic Retroviruses (HTLV-III) Associated with AIDS
Из статьи:  Serological Analysis of a Subgroup of Human T-Lymphotropic Retroviruses (HTLV-III) Associated with AIDS
Из статьи: Serological Analysis of a Subgroup of Human T-Lymphotropic Retroviruses (HTLV-III) Associated with AIDS

Зеленым цветом подчеркнул исключение, смотрим, что там в работе (19), а там на блотах с белками очищенного «вируса» у пациентов со СПИДом или с риском СПИДа (блоты 3, 4, 5, 6, 10, остальные блоты Галло не относит к СПИДу) видим только одну прореагировавшую полосу с молекулярной массой около 41 кДа. На этой полосе располагается человеческий белок актин,  который попадает в процессе очистки «вируса» в градиент 1,16 в составе клеточных обломков. 

Из статьи:  Antibodies Reactive with Human T-Lymphotropic Retroviruses (HTLV-III) in the Serum of Patients with AIDS
Из статьи: Antibodies Reactive with Human T-Lymphotropic Retroviruses (HTLV-III) in the Serum of Patients with AIDS
Из статьи:  Antibodies Reactive with Human T-Lymphotropic Retroviruses (HTLV-III) in the Serum of Patients with AIDS
Из статьи: Antibodies Reactive with Human T-Lymphotropic Retroviruses (HTLV-III) in the Serum of Patients with AIDS

Итого, в опытах Монтанье антитела из сыворотки пациента со СПИДом не реагировали с очищенным вирусом, а реагировали только с белками из клеточного лизата.

В опытах Галло антитела реагировали с белками из клеточного лизата и только с одним белком, который находился в градиенте 1,16 и этот белок — человеческий белок актин, который попадает в данную полосу плотности в составе клеточных обломков. 

Таким образом, либо ВИЧ абсолютно не иммуногенен (не вызывает выработку антител), либо в полосе плотности 1,16 не было вирусных белков. Нет белков — нет вируса.

P. S. Насмотревшись на представленные блоты с белками очищенного вируса и с белками клеток можно придти к выводу, что в современных иммуноблотах используется не очищенный «вирус» (как заявляется), а полный набор клеточных белков раковых клеток линии лимфомы, то есть лизируют не «вирус», а клетки. И в этих блотах нет ни одной специфической реакции. Имеющий глаза да увидит.

АРТ повышает число CD4-клеток у ВИЧ-отрицательных

График из работы https://science.sciencemag.org/content/sci/271/5249/670.full.pdf

Там давали АЗТ в профилактических целях, видимо, медицинскому работнику, который имел риск заражения ВИЧ из-за укола иглой. Терапия начиналась через 30 минут после укола. Было показано, что профилактическая терапия проводилась у незараженного.

Вот что пишут авторы:

«Через несколько часов после лечения АЗТ количество лимфоцитов и CD4-клеток существенно возросло по сравнению с исходным количеством (рис. 1). Oно увеличилось на 30% к 12 дню и осталось на этом высоком уровне в течение всего периода лечения».

«Немедленный рост количества CD4-клеток после антиретровирусной терапии может отражать ответ на сам препарат, а не на лекарственно-индуцированную защиту CD4-клеток от гибели, как предполагалось в других исследованиях».

«Самое главное, ответ [увеличение числа CD4-клеток], который мы наблюдали, оспаривает современные интерпретации эффекта АЗТ (и, возможно, других противовирусных препаратов) по количеству лимфоцитов в леченых пациентах».

Авторы приходят к выводу, что АЗТ приводит к перераспределению CD4-клеток в организме, что сопровождается их увеличением в периферическом кровотоке.


Уровень вирусной нагрузки при ВИЧ мало влияет на изменение числа CD4-клеток

В работе https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17003398 исследовали прогностическое влияние вирусной нагрузки у пациентов, не принимавших АРТ, на число CD4-клеток.


Получили: 


«В исследуемой когорте медианное модельное снижение CD4-клеток среди участников с уровнем РНК ВИЧ [вирусной нагрузки] менее 500 , 501 — 2000, 2001 — 10 000, 10 001 - 40 000 и более 40 000 копий/мл составило 20, 39, 48, 56 и 78 клеток/мкл соответственно» 


Далее авторы пишут, что очень разная вирусная нагрузка (от 500 до 40 000 копий/мл) влияет на изменение числа CD4-клеток в пределах 4-6%.  


Выводы авторов:


«Уровень РНК ВИЧ [вирусная нагрузка] минимально предсказывает скорость снижения CD4-клеток [мало влияет на число CD4-клеток] у нелеченых людей. Другие факторы, пока еще не определенные, вероятно, приводят к потере CD4-клеток при ВИЧ-инфекции»


P. S. Действие АРТ состоит ТОЛЬКО в подавлении вирусной нагрузки, которая, согласно данному исследованию, практически не влияет на уровень CD4-клеток. 


P. P. S. Для особо любознательных рекомендуется найти текст «Дюсберг исказил суть цитируемой статьи» на странице  https://ru.wikipedia.org/wiki/%D0%92%D0%98%D0%A7-%D0%B4%D0%B8%D1%81%D1%81%D0%B8%D0%B4%D0%B5%D0%BD%D1%82%D1%81%D1%82%D0%B2%D0%BE


Вы обнаружите, как авторы данной статьи в википедии 


(1) прилепили ярлык к г-ну Дюйсбергу; 


(2) пытаются доказать, что 2 + 2 = 5, то есть интерпретировать выводы из исследования диаметрально противоположным образом. 


На кого это рассчитано?


 

Забытое открытие Люка Монтанье

Как известно, ВИЧ заражает клетки, содержащие рецептор CD4, преимущественно Т-лимфоциты и макрофаги. Но так было не всегда. До признания факта, что вирус LAV Люка Монтанье и вирус HTLV-III Роберта Галло — это один и тот же вирус ВИЧ, вирус LAV умел заражать B-лимфоциты. 

По книге "Retroviruses in Human Lymphoma/leukemia"
По книге "Retroviruses in Human Lymphoma/leukemia"
Collapse )

Нюансы в клонировании ВИЧ

При клонировании ВИЧ Р. Галло делал следующее:


(1) свежую культуру H9 (HUT-78) заражал супернатантом из культуры, в которой сокультивировались активированные лимфоциты 10 пациентов с признаками СПИДа с клетками H9 (Т-клетками пациента с лимфомой);


(2) проводил центрифугирование супернатанта зараженной культуры H9;


(3) проводил обратную транскрипцию всех poly(A)-РНК из частиц, сконцентрировавшихся в градиенте плотности 1, 16, сформировав таким образом библиотеку кДНК;


(4) экстрагировал из клеток low-weight ДНК, гибридизировал их с кДНК для проверки на наличие генома ВИЧ; 


(5)  загонял давшие сигнал low-weight ДНК в фаговый вектор;


(6) высевал клетки E.cori на питательной среде;


(7) заражал их сильно разведенным раствором с фагами, получившимися на шаге (5);


(8) после образования негативных фаговых колоний (фаговых бляшек) проводил их скрининг посредством гибридизации с кДНК;  


(9) отбирал давший сигнал клон (полноразмерный клон был назван BH-10). 




Однако, имеются данные, что:


(10) при ВИЧ-инфекции из плазмы можно получить вирионы HERV-K, которые концентрируются центрифугированием в градиенте 1, 16;


(11) стимулированные Т-лимфоциты в культуре экспрессируют вирионы HERV-K;


(12) экспрессированные частицы HERV-K переносят свою геномную НК и могут проникать в другие клетки;


(13) полный геном HERV-K примерно равен по размеру полному геному ВИЧ, поэтому их невозможно разделить по длине в геле.


Таким образом, на основе (10, 11, 12, 13) можно предположить, что в супернатанте (2) были вирионы HERV-K, которые попали в градиент плотности 1,16, и обратные транскрипты с генома которых попали в библиотеку кДНК (3), а неинтегрированные геномы (low-weight ДНК, 4) в фаговые векторы (5). 




Могли ли шаги (6 — 9) разделить ДНК ВИЧ и ДНК HERV-K, и не могла ли ДНК HERV-K попасть в фаги, образовавшие бляшку, из которой произошел клон BH-10?


Скрининг посредством кДНК (8) дал бы сигнал на бляшке, которая содержит только ДНК ВИЧ или только ДНК HERV-K или ДНК ВИЧ и ДНК HERV-K вместе. Поэтому скрининг не поможет выделить бляшку, которая содержит только ДНК ВИЧ.


Считается, что все фаги, образующие одну бляшку, имеют одинаковую вставку ДНК, то есть являются потомством одного фага.


Так ли это на самом деле? Подобным вопросом задается один исследователь здесь https://www.researchgate.net/post/How_to_determine_the_diversity_of_phage_display:


«I don't understand this part. I mean how do you know that in a single colony that you won't have different sequences. Why can't a single colony have more than one diversity (more than one sequence)?»


На это он получает такие ответы.


Ответ первый:


«... It is based on two main assumptions. None of them is 100% true


1. There is no more tan one inserted gene in each E.coli colony. Depending on the ratio between electrocompetent cells and plasmid DNA during transformation in library construction, and on the ratio between E.coli cells and phages during infection after selection rounds, this can be approximately true or not. when using large amounts of DNA/phages and not so many cells this assumption may be completely false.


2. Every colony contains a different DNA. In normal situations, its true that most colonies contain different DNAs, at least in the original library and probably after the first round of selection. Anyway, some colonies can be replicates of the same clone. After selection, diversity diverges from the number of colonies because enrichment means that the same clone is repeated multiple times.»


 И далее:


«Yes. Actually each colony is a pure strain because all the cells come from a single one. But this single cell can contain more than one phagemid (if an excess of DNA was used for electroporation, for instance) so cells in the progeny (same colony) can keep one of them, or even the whole mixture. It introduces some heterogeneity in the theoretically pure strain.»


Итого, в случае наличия HERV-K в градиенте (3) нет гарантий, что клон BH-10 состоит только из генома ВИЧ.  


Гетерогенность «теоретически чистого» клона способна привести к неточному секвенированию. Неточное секвенирование приводит к появлению неспецифических праймеров для ПЦР.  

Нюансы СПИДа у резус-макак

Из книги Питера Дюйсберга:

У резус-макак, которых заражали ВИО, заболевание было не похоже на ВИЧ-ассоциированный СПИД. Например, у них не сильно уменьшалось число T-клеток. 

Заболевание скорее напоминало обычную вирусную инфекцию.

Дюйсберг делает вывод о некорректности утверждения «заражение ВИО вызывает СПИД у резус-макак». 

В Австралии защищена диссертация, критически рассматривающая государственные программы вакцинации

Взято отсюда http://round-the-world.org/?p=1266

В Австралии защищена диссертация, критически рассматривающая государственные программы вакцинации и настаивающая на их изменении.

Вашему вниманию предлагаю перевод небольшой заметки в голландских новостях.

«Австралийский аспирант, вызвавшая ажиотаж в медицинском мире, написала диссертацию об ошибках в государственной программе вакцинации и фармацевтической промышленности. К большому неудовольствию медицинского истеблишмента, университет одобрил текст ее диссертации.
Так Judy Wilyman, видный деятель анти-вакцинационного движения, недавно стала обладателем титула «доктор философии» (Ph.D.).

Основные положения диссертации

Необычная научная работа Wilyman включает в себя следующие положения:

1. Объективного надзора за противопоказаниями или оценки эффективности вакцинации для населения, которая могла бы предоставить важные данные о последствиях вакцинации для населения, не существует.

2. ВОЗ не имеет никакого отношения к международному сообществу и контроль над ВОЗ осуществляется, исходя из интересов крупных корпораций и Всемирного банка.

3. Не существует подтвержденных научных доказательств, что те заболевания, для которых рекомендованы прививки, представляют серьезную угрозу здоровью большинства австралийских детей.

Collapse )

Эффективна ли антиретровирусная терапия?

Существуют «суррогатные показатели», посредством которых определяется текущее положение дел у ВИЧ-положительного пациента: вирусная нагрузка (число копий РНК ВИЧ в крови) и число CD4-клеток в крови.

Задачей АРВТ является снижение вирусной нагрузки. Согласно теории, вслед за этим должно повышаться число CD4-клеток в крови, что и наблюдается достаточно часто.

Таким образом, «суррогатные показатели» отражают вирусологический и иммунологический статус пациента. 

А на сколько данные «суррогатные показатели» коррелируют с клиническим исходом? У пациента на АРВТ снизилась вирусная нагрузка, увеличилось число CD4-клеток. Изменился ли при этом для него риск заболеть СПИД-ассоциированным заболеванием в некоторой временной перспективе? 

Крупное исследование, призванное дать ответ на этот вопрос, было проведено в 2008 году. В исследовании были обработаны данные рандомизированных клинических исследований с 1994 по 2006 год.

Авторы, по их же утверждению, не смогли продемонстрировать прочной связи между изменением «суррогатных показателей» на АРВТ и влиянием этого изменения на клинический исход для пациентов. 

Это можно трактовать как бесполезность АРВТ и непоказательность «суррогатных показателей» для оценки состояния здоровья пациента.

P.S. Если ВИЧ существует, а его репликация в организме вызывает СПИД, то улучшение «суррогатных показателей» (уменьшение репликации вируса и рост числа CD4-клеток) должно явным образом влиять на клинический исход для пациента, в первую очередь, на уменьшение риска заболеть СПИД-ассоциированным заболеванием. Это предсказание, которое следует из теории, и на котором построены подходы к терапии и диагностика эффективности терапии в ВИЧ-индустрии. Но данное предсказание не подтверждается на очень большой статистической выборке.  Из улучшения «суррогатных показателей» с помощью АРВТ не следует  благоприятный клинический исход, что как бы намекает на ложность доктрины.     

При этом накапливаются данные, что важным прогностическим показателем является уровень ассоциированного с микробной транслокацией белка CD14 в плазме. Именно его увеличение коррелирует с неблагоприятным клиническим исходом, вне зависимости от уровня «вирусной нагрузки»