Как можно доказать наличие ВИЧ в организме?
1. Взять плазму, медленным центрифугированием удалить "мусор"
2. Быстрым центрифугированием в градиентах плотности 20-60% раствора сахарозы очистить вирионы
3. Проверить активность обратной транскриптазы посредством соответствующих инструментов и наличие p24 посредством моноклональных антител во фракциях, соответствующих градиентам 1,16-1,17 г/мл
4. До лизирования очистить эти фракции РНКазой, потом протеазой
5. Очистить лизированные фракции из полос 1,16-1,17 г/мл от ДНК ДНКазой
6. Экстрагировать РНК
7. Разделить их по длине
8. Произвести long ОТ-ПЦР на праймерах, специфичных для 5' и 3'-концов последовательности ВИЧ для РНК размером около 9 Кб с учетом всех рекомендаций, позволяющих минимизировать возможную рекомбинацию.
9. Произвести секвенирование получившихся ДНК размером около 9 Кб
10. Произвести сравнение выравненных последовательностей с ВИЧ посредством blast alignment.
Подозреваю, что ВИЧ-инфекция не подтвердится у примерно 100%.
P.S. Скажут, что это дорого. Но это на порядки дешевле закупок АРТ на одного пациента.
