cryptopolicy (cryptopolicy) wrote,
cryptopolicy
cryptopolicy

Category:

Если ли в иммуноблоте человеческие белки?

В одном из предыдущих постов (https://cryptopolicy.livejournal.com/2776.html) я немного писал про иммуноблоты. 


Тезисно:


1. Практически все применяющиеся при диагностике иммуноблоты являются лизатными (на 2019 год). Потому что лизаты считаются более чувствительными тестами, чем блоты из рекомбинантных белков.


2. Лизатные иммуноблоты в качестве антигенов содержат человеческие белки. Ниже я покажу, что в лизатных иммуноблотах много человеческих белков, которые по массе идентичны вирусным. 


3. Если в человеческом организме есть аутоантитела к данным белкам, то они окрасят полосы. При этом невозможно отличить чем именно были окрашены полосы: специфической реакцией «вирусный антиген — антитело к вирусному белку» или неспецифичеcкой реакцией «антиген человеческого белка — аутоиммунное антитело»


4. Если неизвестно, специфическая или неспецифическая реакция окрасила  каждую полосу, то распределение окрашенных полос не даст ровным счетом ничего для правильной постановки диагноза.


Для изготовления лизатных иммуноблотов (упрощенная схема):


1. Производится специальная очистка флюидов зараженных клеток. 


2. Затем очищенные флюиды определенным образом «лизируются» и остаются только белки. 


3. Эти белки распределяют на подложке по полосам в соответствии с их массой. Каждому вирусному белку соответствует определенная полоса. 


Давайте посмотрим на то, как подобное «распределение» выглядит на практике.








Microvesicles Are a Source of Contaminating Cellular Proteins Found in Purified HIV-1 Preparations.




 Авторы работы, из которой взято фото, проводили очистку флюидов описанным выше способом и распределяли получившиеся белки по массам (справа для удобства некоторые полосы подписаны соответствующими им белками, черным — это авторы подписали, красным — это я добавил).


Надо понимать, что эти полосы не содержат p24, gp120 и gp160, а содержат смесь белков массой 24 кДа, 120 кДа и 160 кДа соответственно.


Основная «фишка» данной картинки в том, что панель (A) содержит белки из незараженной клеточной линии. В эксперименте (A) клеточную линию H9 (которая используется согласно патенту Галло на тесты ) не заражали вирусом, но очистили ее флюиды способом, который применяется при изготовлении лизата. Соответственно, полосы на ней — это только человеческие белки, ну или белки не ассоциированные с ВИЧ-инфекцией.


В экспериментах (B) и (С) используются  зараженные вирусом линии H9. На панелях (B) и (С) показаны полосы, которые содержат как вирусные белки, так и те человеческие белки, что представлены на панели (A) (тут я не совсем точен, так как виды этих человеческих белков могут измениться из-за заражения, но это детали). 


Рассудим логически. Если очищенные флюиды незараженной линии (A) содержат человеческие белки, то заражение этой линии вирусом (B, С) приведет к тому, что в эти очищенные флюиды добавятся вирусные белки, а человеческие никуда из них не денутся.


Количество человеческих белков в лизате мы можем оценить по полосам на панели (A).


По нормам РФ блот считается положительным при наличии двух из трех полос gp41, gp120 и gp160. При этом мы видим по размерам и окраске полос, что на «незараженной» панели (A) белков массы 41 кДА, 120 кДа и 160 кДа много (больше чем на «зараженных» панелях). Значит, этих белков будет полно в лизате.


Полосу для gp41 сами авторы ассоциируют с человеческим актином. То есть актин в вирусном лизате есть, аутоантитела к нему дадут неспецифическое окрашивание полосы для gp41. 


Subscribe

Recent Posts from This Journal

  • Post a new comment

    Error

    Anonymous comments are disabled in this journal

    default userpic
  • 0 comments